中华鳖GnRH 1基因cDNA克隆及表达特征

为了解GnRH基因在中华鳖(Pelodiscus sinensis)性腺发育和繁殖过程中的表达特征,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从中华鳖全脑中获得与生长生殖调控密切相关的GnRH 1基因全长cDNA,并运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测GnRH 1在成鳖不同组织和胚胎发育时期的表达水平.结果显示:中华鳖GnRH 1基因cDNA全长546 bp,其中5′非编码区(5′UTR)99 bp,3′非编码区(3′UTR)168 bp,开放阅读框(ORF)279 bp,编码92个氨基酸,分子质量为10.23 kDa,理论等电点pI为5.65,具有N端信号肽(1～23 aa)、 核心十肽区域(24～33 aa)、 断裂位点GKR(34～36 aa)及相关肽区域(37～92 aa),符合GnRH蛋白典型结构特征.系统进化树结果显示,中华鳖GnRH 1基因和绿海龟(Chelonia mydas)、 墨西哥箱龟(Terrapene carolina mexicana)及西部锦龟(Chrysemys picta bellii)GnRH 1基因聚为一支.qRT-PCR结果表明,GnRH 1基因在中华鳖雌雄个体的8个组织中均有表达,在脑和性腺组织中高表达,且具有性别差异,雄性中华鳖中的表达显著高于雌性(P<0.05);在10个胚胎发育时期均表达,且随发育时间的后移,表达量显著增加,在第16期达到峰值.GnRH 1基因可能在中华鳖生长及性腺分化中具有重要作用.