传染性造血器官坏死病毒抗原表位富集区的原核表达及应用

以传染性造血器官坏死病毒 Sn1203株（IHNV－Sn1203）基因组 RNA 提取物为模板，利用生物信息学软件分析，通过 RT－PCR 一步法扩增截短的 G 蛋白基因序列（约375 bp），将其克隆到表达载体 pET－27b 中，构建重组表达质粒 pET－27b－IHNV－short G，通过大肠杆菌 Rosetta 表达菌株获得高效表达。在 IPTG 浓度为0．25 mmol／L 时，37℃诱导表达，经 SDS－PAGE 电泳分析显示目的蛋白相对分子质量约为14000，符合预期大小，并以包涵体的形式表达，4 h 时目的蛋白表达量最大。蛋白经变性、复性处理后获得不带任何标签的纯化蛋白，并利用该蛋白制备兔抗血清。 ELISA 结果显示，兔抗血清的效价为1∶80000，说明制备的兔抗血清能够识别表达的重组蛋白；间接免疫荧光结果表明兔抗 G 蛋白血清具有良好的特异性，并且与 VHSV 参考毒株没有任何交叉反应。