地榆醇提物对对虾致病菌VPAHPND生长影响及最适内参基因的筛选

为筛选适用于研究地榆(Sanguisorba officinalis L.)对对虾急性肝胰腺坏死病致病株副溶血弧菌(Acute hepatopancreatic necrosis disease caused by Vibrio parahaemolyticus,VPAIND)抑制机理的内参基因,本文探究了地榆醇提物胁迫下VPAPND生长的变化,并利用qRT-PCR技术探究了该条件下VPAHPND中6种常见内参基因(recA、pvsA、pvuA、gapdh、16S rRNA和rpo S)的表达情况,利用GeNorm、Norm Finder、Best Keeper、Delta CT以及Ref Finder这5种方法对其表达稳定性进行了评估和筛选.结果 显示,地榆醇提物能抑制VPAHPND的生长,且抑制效果与浓度呈正相关.在不同浓度地榆醇提物处理条件下,这6种内参基因扩增产物特异性良好,其中,Ct值变化差异最小的为16S rRNA (CV=3.88),变化差异最显著的为pvsA(CV=12.53).5种方法对6种内参基因稳定性排序略有差异,其中,GeNorm给出的稳定性排序为rpo S=16S rRNA＞ gapdh＞ rec A＞ pvu A＞pvs A;Norm Finder结果为gapdh＞ rpo S＞pvuA＞16SrRNA＞ rec A＞pvs A;Best Keeper结果为16S rRNA＞ rpo S＞gapdh＞ recA＞pvuA＞pvsA;Delta Ct结果为gapdh＞ rpo S＞pvu A＞16S rRNA＞ rec A＞pvs A;Ref Finder综合排名结果为rpo S＞gapdh＞ 16S rRNA＞pvu A＞pvs A＞rec A.本研究根据配对变异系数结果,最终推荐同时使用rpo S和gapdh作为该条件下内参基因.本研究为以地榆为核心药物的AHPND防控技术的建立和从基因表达角度研究地榆对VPAHPND的作用机理提供了基础.