对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28和VP26的毕赤酵母组成型分泌表达

近年来，重组 VP28和 VP26蛋白作为蛋白亚单位疫苗，在增强对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)感染的过程中具有重要作用。本研究根据GenBank中WSSV的基因序列设计引物，以WSSV粗提液为模板进行普通PCR扩增，得到VP28和VP26基因，再用引物悬挂法将EcoRⅠ和XbaⅠ酶切位点分别添加到 VP28和 VP26基因的5￠端和3￠端。目的基因经双酶切后插入到表达载体pGAPZαA，转化TOP10大肠杆菌，经博莱霉素(Zeocin)抗性筛选阳性重组酵母表达载体。AvrⅡ酶切线性化之后，电击转化 X-33毕赤酵母感受态细胞，经 Zeocin 抗性筛选得到阳性重组酵母。SDS-PAGE电泳分析重组酵母表达上清液的目的蛋白，没有检测到VP28和VP26重组蛋白。随后，采用蛋白质银染法，结果显示，与空载pGAPZαA组相比，VP28和VP26表达上清液组有明显的条带，证明VP28和VP26在毕赤酵母中成功表达，蛋白分子量大小约为32 kDa。