传染性造血器官坏死病病毒参考蛋白的研制

为规避活病毒作参考物质存在的生物安全风险,本研究利用毕赤酵母表达系统表达了传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白来制备参考蛋白,作为IHNV免疫学检测参考物质.本研究选用IHNV糖蛋白基因(IHNV-G)为目的基因,根据GenBank中IHNV全基因序列设计特异性引物,以IHNV-uk株病毒核酸为模板,通过RT-PCR获得糖蛋白基因片段,将其克隆至真核表达载体pPICZαA,转入毕赤酵母感受态细胞GSll5中,使外源基因与酵母基因融合,通过1％甲醇诱导表达外源蛋白,SDS-PAGE分析显示获得可溶性表达蛋白,分子量大于70 ku.经Western Blot和ELISA分析,该表达产物可以被IHNV多抗特异性识别.0.1531 mg的重组蛋白与0.3125TCID50 IHNV在ELISA实验中反应原性相当,-20℃可稳定保存2个月,说明其在一定程度上可替代病毒作为参考物质.该研究为IHNV ELISA检测试剂盒的开发奠定基础.