圆口铜鱼精子超低温冷冻保存

为建立圆口铜鱼(Coreius guichenoti)精子超低温冷冻保存方法,采用计算机辅助精子分析系统(CASA)评价了4种稀释液(D15、D20、L1、D1),3种抗冻保护剂[二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(METH)]在3种体积浓度(7.5％、10％、12.5％,V/V)下对圆口铜鱼精液的冷冻保存效果,并比较了150 mOsm/kg NaCl与超纯水作为激活剂对精子活力的影响.结果表明,D1组稀释液的精子活率(MOT)最高,为(74.64±13.17)％,与鲜精无显著差异(P>0.05);以10％甲醇作为抗冻保护剂的圆口铜鱼精子经超纯水激活后,测得MOT最高,达到(78.11±14.74)％,与鲜精无显著差异(P>0.05),精子运动速度达最大,平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、VAP(平均路径运动速度)分别达到(50.28±12.46)μm/s、(35.06±10.82)μm/s、(39.44±12.46)μm/s,精子快速运动时间和寿命分别为(8.67±1.15)s、(33.33±5.00)s,显著低于鲜精(P<0.05);7.5％甲醇组和7.5％二甲基甲酰胺组的MOT次之,分别为(77.71±17.74)％、(76.42±12.49)％,抗冻剂二甲基亚砜组的MOT显著低于甲醇组、二甲基甲酰胺组(P<0.05).12.5％的3种抗冻保护剂中,几乎无精子存活;在不同种类不同浓度的抗冻剂保护下,10％甲醇组,相较于使用超纯水激活,用150 mOsm/kg NaCl激活后的精子活率和寿命更高,说明Na+有延长冻精寿命,提高精子活率的作用.研究表明,D1+10％METH(7.8 g/L NaCl+0.5 g/L KCl+15 g/L葡萄糖+10％METH)可用于圆口铜鱼精液超低温冷冻保存,为圆口铜鱼的繁育工作和种质资源保护奠定了基础.