斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立

[目的]对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础.[方法]以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进行解交联染色体检验,研究不同交联时间(5,10,20,30,40 min)、不同菌丝用量(10 mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50g菌丝)及不同超声功率(15,20,25,30 W)、超声时间(1,3,5 s)、超声间隔时间(10,20,30,40 s)、超声次数(15,25,30,40次)对试验效果的影响.在优化的条件下对菌丝进行处理,获得合格的DNA片段,进行CHIP试验,采用随机PCR方法检测染色质免疫共沉淀效果.[结果]适用于斜卧青霉Hac1的最佳染色质免疫共沉淀试验的条件为:交联时间控制在20 min以内;最佳菌丝用量为10 mL CHIP缓冲液中加入1 g菌丝;25 W超声功率,工作时间5 s,间隔时间40 s,超声30次.在优化的条件下富集DNA片段,进行随机PCR,结果在500～750 bp间可见明显的扩增条带.[结论]优化了斜卧青霉转录调控因子Hac1 CHIP条件,成功进行了CHIP试验.