CD20片段抗体在红花悬浮细胞中的表达研究

[目的]研究用红花愈伤组织建立红花悬浮细胞培养体系的条件,并利用红花悬浮细胞通过农杆菌介导转化法表达CD20复合片段抗体.[方法]以红花子叶为外植体,研究不同种类激素组合对愈伤诱导率的影响,筛选优质愈伤组织进行悬浮培养,探索不同初始接种量、蔗糖质量分数、水解酪蛋白质量浓度对红花悬浮细胞生长的影响.将CD20复合片段抗体基因两端引入Xma Ⅰ/EcoR Ⅰ酶切位点,并将其与pEASY-T1和pBasta载体相连,构建pEASY-T1-CD20克隆载体和pBasta-CD20表达载体,再将构建的pBasta-CD20表达载体转入根瘤农杆菌,利用根瘤农杆菌介导红花悬浮细胞转化法表达CD20复合片段抗体.[结果]红花子叶愈伤诱导最佳条件为MS+ NAA 2mg/L+6-BA 0.5 mg/L、温度(25±0.1)℃、光照70 μmol/(m2·s)连续光照,继代培养条件为MS+ NAA 1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、30 μmol/(m2·s)连续光照、温度(25±0.1)℃.悬浮细胞体系培养最佳条件为不加琼脂粉的MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L、接种量2.5g(50 mL培养基)、蔗糖质量分数2％、水解酪蛋白800 mg/L.pBasta-CD20表达载体构建成功,且目的蛋白在红花悬浮细胞中成功表达.[结论]成功构建了红花悬浮细胞培养体系,并用该体系成功表达了CD20复合片段抗体.