秦巴蛹虫草原生质体的制备及再生条件研究

[目的]研究秦巴蛹虫草原生质体制备及再生的最适条件,建立高效制备和再生原生质体的方法.[方法]以秦巴蛹虫草无性型菌株CM-16为材料,研究细胞壁裂解酶种类、酶解时间、酶解温度、菌丝体菌龄及稳渗剂种类对原生质体制备及再生效果的影响,并在单因素试验结果基础上进行正交优化试验.[结果](1)以0.6 mol/LNaCl为稳渗剂,用混合酶(质量分数1％纤维素酶和质量分数0.5％蜗牛酶按1;1体积比混合)在(26±1)℃对菌龄6d的菌丝酶解3h,原生质体的产量最高.(2)以0.6 mol/L甘露醇为稳渗剂,用混合酶(质量分数1％纤维素酶和质量分数0.5％蜗牛酶按1∶1体积比混合)在(26士1)℃对菌龄5d的菌丝酶解2h,原生质体的再生率最高;验证试验结果表明,在此条件下,原生质体再生率平均为25.7％,此时原生质体平均产量为83.42×105 mL-1.[结论]对酶解温度、酶解时间、菌丝体菌龄、稳渗剂及酶系种类等条件的优化,可提高秦巴蛹虫草原生质体的产量及再生率.