诊断试剂用己糖激酶的制备工艺研究

为获得微生物工程菌株来源的己糖激酶(Hexokinase,HK)并提高HK的发酵水平,对已构建产HK的大肠工程菌株BW25113-pYBE/schk进行发酵工艺优化,为HK法血糖检测试剂盒的配制提供技术支撑.本研究采用正交试验对菌株发酵工艺进行优化,并对超声破壁获取粗酶及粗酶的纯化工艺进行研究.结果表明:工程菌株BW25113-pYBE/schk的最佳发酵培养条件为:装液量80mL/500mL,发酵液初始pH6.5,发酵温度37℃,接种量2％,诱导剂添加时间为接种后1h,转速180 r/min.超声破壁最佳工艺为:功率200W,工作1.5s间歇1 s,破壁5 min.在最佳发酵和破壁工艺条件下,HK的发酵活力稳定在157 U/mL,经过Ni-Agarose His标签蛋白试剂纯化获得60 kD的HK.本研究建立了高产己糖激酶大肠杆菌工程菌株的发酵工艺,有利于降低己糖激酶法血糖试剂盒的成本,为糖尿病患者的准确诊断及普及提供便利条件.