真核表达载体 pcDN A3.1(+)-G FP-M C1R 的构建及在羊驼毛囊干细胞中的表达
Journal of Agricultural University of Hebei(2015)
摘要
旨在构建含有 MC1R基因的pcDNA3.1(+)真核重组表达载体,为进一步研究 MC1R的生物学功能奠定基础。应用RT‐PCR技术从羊驼皮肤cDNA文库中扩增 MC1R基因全长cDNA ,然后通过双酶切将 MC1R基因全长cDNA克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),然后采用脂质体法转染体外培养的羊驼毛囊干细胞后,通过G418筛选培养,建立稳定的转染体系,直接荧光观察pcDNA3.1/MC1R融合蛋白在细胞中的分布定位,并通过Western Blot方法检测 MC1R在羊驼毛囊干细胞中的表达。结果表明,成功构建了pcDNA3.1/MC1R重组表达载体,并且发现试验组的毛囊干细胞中表达 MC1R蛋白显著高于空白组(P<0.05)。成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pcDNA3.1/MC1R ,且 MC1R基因在羊驼毛囊干细胞中获得表达。
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关键词
alpaca,MC1R,hair follicle stem cells,eukaryotic expression vector,transfection
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