HPLC测定大鼠全血中虫草素药代动力学方法的建立

建立一种灵敏、稳定的检测血液中虫草素及其代谢物的高效液相色谱方法,并报告采用该方法进行药代动力学的初步研究.大鼠全血0.5 mL,加入甲醇1mL,涡旋振荡2 min,超声10 min,4℃条件下10 000 r·min-1离心15 min,取上清室温条件下氮气吹干,用体积分数为0.06的乙腈溶液0.5 mL复溶,4℃条件下15 000 r·min-1离心10 min,取上清过0.22μm微孔滤膜进行HPLC检测;色谱条件为Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈冰,6:94(V/V),流速0.8 mL· min-1,柱温30℃,紫外检测波长259 nm.虫草素在0.1～5.0 μg· mL-1浓度范围内线性关系良好,线性回归方程为Y=10.97X-11.73,相关系数r=0.998 0血液样品中虫草素在高、中、低浓度的回收率分别为99.63％、95.37％和93.26％.全血中虫草素的药物代谢动力学初步研究的结果为给药后10～120 min内均未检测到虫草素原型,相同色谱条件下,保留时间为8.8 min左右检测到一虫草素的未知代谢物,且该物质在30 min时含量最高,随后逐渐降低.对该产物富集后通过质谱检测得未知代谢物分子量为252 M.该方法灵敏度高,重现性好,可用于大鼠全血中虫草素的代谢研究;研究结果同时表明,虫草素在大鼠体内代谢速度快,按40 mg·kg-1剂量灌胃,即使灌胃给药后10 min也未检测到虫草素原型.