火龙果 MSAP 体系的优化及组培苗 DNA 甲基化检测

以火龙果组培苗为材料，采用正交实验设计，优化了适用于火龙果的MSAP体系．结果表明，基因组DNA约300 ng ，采用 EcoR I 10 U和M s p I／H p a II 2.5 U两步酶切法，酶切较充分；使用20μL预扩增体系，含酶连产物1.0μL ，M ix 10μL ，上下游引物E＋A／H M＋T各2.0μL ；选择性扩增反应体系20μL ，含稀释50倍的预扩增产物3.0μL ，Mix 5μL ，上下游引物E＋ANN／HM＋ TNN各2.0μL ．选用17对引物检测发现，组培苗CCGG位点的甲基化程度约为24％，平均多态性比率为1.8％，表明火龙果组培苗在短期无性系繁殖中，存在一定程度的DNA甲基化差异．