NTE基因ShRNA慢病毒载体的构建与鉴定

[目的]构建神经病靶酯酶(NTE)蛋白低表达的ShRNA重组慢病毒表达系统.[方法]依照ShRNA序列设计原则设计带酶切位点的NTE ShRNA序列,与表达载体pLL3.7连接构建NTE ShRNA重组表达质粒,转染DH5α菌观察重组表达状况,与pCVM-VSV-G包膜质粒和pCMV-dr8.2 dvpr表达质粒共转染293T细胞,包装得到重组慢病毒.用病毒稀释法以绿色荧光蛋白(GFP)为标记,确定转染效率及病毒含量.[结果]经酶切及测序鉴定结果显示成功构建pLL3.7-NTE ShRNA慢病毒载体.重组慢病毒质粒与辅助质粒共转染293T细胞后获得高表达的细胞,共转染48 h后,收集病毒液检测病毒滴度达4.5×104/mL.[结论]成功构建NTEShRNA慢病毒重组表达系统.