表达KsdD重组大肠杆菌的构建及转化工艺优化
Journal of Shandong Agricultural University(Natural Science Edition)（2020）
摘要
3-甾酮-△1-脱氢酶(KsdD)是催化甾体化合物C1,2位脱氢反应的关键酶,在甾体药物的生产中起着重要作用.本研究首先通过对红球菌、分枝杆菌及简单节杆菌来源的KsdD蛋白进行氨基酸序列分析,并进一步通过酶活比较及底物催化能力的验证,最终筛选获得具有较高C1,2位脱氢活力的脱氢酶KsdDR2.研究了过表达KsdDR2蛋白重组大肠杆菌的转化条件对底物雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)转化的影响,结果表明,在30℃转化条件下,当AD:羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)的摩尔比为1:1.5时,可使底物AD的转化率达99％以上.本研究为利用工程菌株高效生产C1,2位脱氢甾体化合物的研究奠定了理论基础.
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