苹果树腐烂病菌VmSom1基因克隆与序列分析

苹果树腐烂病(Valsa canker of apple)是由苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali)引起的重要枝干病害,危害严重,明确病菌致病机制对有效防控病害十分重要和必要.在众多研究方法中,分离和克隆致病相关基因进而研究基因功能是揭示病菌致病机制的基础.本论文在已建立的苹果树腐烂病菌农杆菌介导的遗传转化体系(Agrobacterium tumefaciens mediated transformation ATMT)基础上,经过表型筛选,发现了V23菌株.该菌株生长速率明显减慢,菌落表面较为湿润,菌丝生长弱,致病性完全丧失且不产生子实体.通过侧翼序列扩增和Blast及基因序列分析,确定了T-DNA插入突变基因位于苹果树腐烂病菌第12号染色体69537和69547之间;系统进化分析显示,该基因的氨基酸序列与Som1基因编码的camp-dependent protein kinase pathway protein聚为一类,因此将该基因命名为VmSom1.它是一个转录调控因子,其基因大小为2723 bp,含有5个外显子和4个内含子,为单拷贝,编码824 aa的氨基酸,包含LisH结构域和NLS结构域,理论蛋白分子量约87.82 kDa,等电点pI为6.39,亲水性较强.本研究为下一步该基因功能研究奠定基础.