鲤鱼重组IL-17N的原核表达条件优化及蛋白纯化

Lei ZHANG,Yongkai TANG,Hongxia LI,Yuxin XU,Yingbin LI,Juhua YU

Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences)（2020）

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摘要

为获得可溶的鲤鱼IL-17N重组蛋白,构建原核重组表达质粒GST-17N、SUMO-GST-17N和MBP-17N,确定IL-17N的最适促溶标签,并优化其诱导表达条件(诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、诱导时间和诱导温度).结果:成功构建了鲤鱼IL-17N原核重组表达载体GST-17N、SUMO-GST-17N和MBP-17N;融合标签MBP、SUMO-GST和GST的促溶效果依次降低,SUMO-GST-17N、MBP-17N上清蛋白占总蛋白比例分别为47.4％、87.0％;MBP-17N的最佳表达条件为0.5 mmol/L IPTG,25℃诱导8～12 h;经过镍柱纯化,获得可溶MBP-17N蛋白,每克总菌约获得0.09 mg MBP-17N蛋白.

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