越橘VcNAC072克隆及其促进花青素积累的功能分析

[目的]分离越橘VcNAC072(NAM,ATAF1/2,CUC2)转录因子,分析其表达模式并探讨其在调控花青素合成过程中的功能,为进一步研究越橘花青素积累的调控机理提供理论基础.[方法]以‘公爵’越橘(Vaccinium corymbosum‘Duke’)为试材,克隆VcNAC072.通过农杆菌介导法获得转基因拟南芥,比较转基因和野生型拟南芥花青素积累的差异.利用酵母单杂交和瞬时表达试验,分析VcNAC072对MYB转录因子AtPAP1的转录调控.[结果]克隆获得越橘VcNAC072,该基因CDS为1 032 bp,编码含有34 3个氨基酸的蛋白质,含有1个保守的NAC结构域.表达分析显示,该基因在不同发育阶段的果实中均可表达,但表达差异明显,在粉色和蓝色果实中表达量较高,在绿色果实中表达量最低.随着VcNAC072表达的升高,果实中花青素含量呈递增的趋势.分析AtPAP1启动子序列,发现其序列中包含NAC转录因子的结合位点.酵母单杂交和烟草瞬时表达试验结果表明,VcNAC072可与AtPAP1的启动子相互作用,并激活其表达.在野生型拟南芥中异位表达VcNAC072,其种子中花青素积累量显著高于野生型.[结论]推测VcNAC072在越橘果实中正向调节花青素的积累.