4株鸭坦布苏病毒的毒力、E基因序列和抗原差异性

[目的]比较鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus,DTMUV)分离株的毒力、分析E蛋白基因序列、研究抗原差异性,为鸭坦布苏病防控提供依据.[方法]将DTMUV-HB(2011)、DTMUV-AH(2014)、DTMUV-GX1(2012)、DTMUV-GX2(2015)4株病毒接种10日龄易感鸭胚进行增殖,并利用6日龄SPF鸡胚测定ELD50.根据测定的病毒含量,将分离毒株稀释为100ELD50/0.5mL,人工感染40只180日龄健康北京鸭,进行临床症状观察、病毒分离、大体剖检,分析分离毒株的毒力有无差异.提取8株DTMUV分离病毒株的RNA,通过RT-PCR扩增E基因,分析比较不同地区的DTMUV的E基因核苷酸和氨基酸序列相似性,构建进化树.利用实验室建立的鸭坦布苏病毒血凝抑制试验分别测定4株病毒阳性血清对4株病毒的HI效价.同时采用固定病毒稀释血清法,利用C6/36细胞测定4株病毒阳性血清对4株DTMUV的血清中和效价.通过交叉血凝抑制试验和血清交叉中和试验比较4株病毒的抗原差异性(R值).[结果](1)各毒株的病毒含量范围在104.7—105.3 ELD50/0.1mL.人工感染鸭试验,攻毒后3 d鸭采食量和产蛋量均显著下降,各组病毒分离阳性率均在85％以上,剖检病变主要表现为卵泡变形、出血.(2)分离株序列分析结果表明,核苷酸序列相似性为95.7％—100％,推导氨基酸序列相似性在98.2％以上.遗传进化分析表明共同构成了一个进化分支.(3)4株病毒及其阳性血清进行血凝抑制交叉试验,计算的抗原性差异R值在0.79—1.12之间;进行细胞中和交叉试验,计算的R值在0.79—1.20之间.[结论]分离的4株DTMUV在毒力、E蛋白基因和抗原性上未见显著差异.