虾青素对牛子宫内膜细胞炎症损伤的保护作用

[目的]利用虾青素较强的抗氧化特性,通过探讨黏膜屏障重塑对脂多糖(LPS)诱导的牛子宫内膜细胞炎症的影响,为牛子宫内膜细胞炎的预防和治疗提供理论基础.[方法]培养液中添加1 μg·mL-1 LPS,培养子宫内膜细胞6 h,检测培养液中炎症因子TNF-0L和IL-6含量,建立细胞的体外炎症模型.在此基础上去掉培养液,重新加入含1×10-6 mol·L-1虾青素的新鲜培养液,继续培养细胞24 h.对照组为不添加LPS或AST,LPS组为仅添加LPS,AST组为添加LPS和AST.采用ELISA法检测培养液中TNF-α和IL-6炎症因子分泌量以及细胞SOD和CAT酶活性,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,利用免疫荧光染色检测细胞紧密连接蛋白Claudin、CDH1、TJP1的分布情况,利用荧光定量RT-PCR法和Western Blot法分别检测Claudin、CDH1、TJP1基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平.[结果]利用1 μg·mL-1 LPS培养子宫内膜细胞6h,检测发现培养液中炎症因子IL-6和TNF-α分泌水平显著高于对照组(P＜0.05),说明LPS诱导子宫内膜细胞产生炎症反应.与对照组相比,细胞内ROS水平显著增加(P＜0.05),SOD和CAT酶活性都显著降低(P＜0.05),说明LPS诱导的子宫内膜细胞炎症造成了氧化损伤.加入1 × 10-6 mol·L-1虾青素培养细胞24 h后,发现培养液中IL-6和TNF-α因子的分泌水平显著低于LPS组(P＜0.05),同时ROS阳性细胞比率显著下降(P＜0.05),SOD和CAT酶活性都显著升高(P＜0.05).LPS组与对照组相比,细胞膜处Claudin、CDH1、TJP1蛋白的荧光信号减弱,这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著降低(P＜ 0.05).加入1×10-6 mol·L-1虾青素培养24 h后,与LPS组相比,在细胞边缘和细胞核内可以检测到荧光信号很强的Claudin、CDH1、TJP1蛋白,而且这3种紧密连接蛋白的mRNA和蛋白表达水平也都显著升高(P＜ 0.05).[结论]虾青素通过降低子宫内膜细胞因炎症反应产生的氧化损伤,减轻炎症导致的子宫内膜细胞紧密连接结构损伤,对子宫内膜的物理免疫屏障起保护作用,为牛子宫内膜炎的预防和治疗提供理论借鉴意义.