玉米赤霉烯酮对断奶小母猪子宫形态学及热应激蛋白70分布和表达的影响

[目的]研究不同水平玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)对断奶小母猪子宫形态学和子宫内热应激蛋白70 (heat shock protein 70,HSP70)的阳性分布规律及mRNA相对表达量的影响.[方法]选择25-28日龄健康三元杂交(杜×长×大)断奶小母猪4 0头,产床上适应环境10d后转入单体笼(0.48 m2).根据日龄(35-38)和平均体重(14.01±0.86 kg),将40头试验小母猪分为4个处理,每个处理1 0个重复,每个重复1头猪.对照组(Control)饲喂基础饲粮,处理1(ZEA0.5)、处理2(ZEA1.0)和处理3(ZEA1.5)分别在基础饲粮基础上添加0.5、1.0和1.5 mg·kg-1的ZEA(ZEA的测定值分别为0、0.52±0.07、1.04±0.03和1.51±0.13 mg·kg-1),小母猪单笼饲养,自由采食和饮水,预饲期10d,正式期35d.试验结束前一天对小母猪禁食12h,全部放血屠宰,打开腹腔后无菌条件下迅速切取一份子宫组织置于2 mL无RNA酶的冻存管中液氮速冻,而后转至-80℃冻存,检测HSP70的mRNA相对表达量,另切取子宫组织块迅速固定于Bouin's液,待做组织切片检测子宫形态学的结构和HSP70的阳性分布规律.[结果]随着饲粮中ZEA水平的升高,子宫肌层和内膜明显增厚,子宫腺数量明显增多,子宫腺密度明显增大;子宫肌层和内膜厚度随着饲粮中ZEA水平的升高呈一次(P＜0.001)和二次(P＜0.001)线性升高,1.5 mg·kg-1处理的子宫肌层和内膜厚度显著高于1.0 mg·kg-1处理(P＜ 0.05),1.0 mg·kg-1处理显著高于0.5 mg·kg-1处理(P＜0.05),0.5 mg·kg-1处理又显著高于对照组(P＜ 0.05).免疫组化结果显示,HSP70免疫阳性物质主要分布于子宫肌层平滑肌细胞、子宫腺上皮细胞、腔上皮细胞和血管内皮细胞的胞质内,偶见胞核着色.对照组免疫阳性较弱呈浅黄色,随着饲粮中ZEA水平的升高,HSP70免疫阳性反应明显增强,颜色加深,呈黄色和棕黄色块状分布.断奶小母猪子宫中肌层、腺上皮、腔上皮及所测部分总HSP70免疫阳性物质的累积光密度(integratedoptical density,IOD)随着饲粮中ZEA水平的升高均呈一次(P＜0.001)和二次(P＜ 0.05)线性升高;总体上,1.5 mg·kg-处理的子宫HSP70免疫阳性物质的IOD显著高于0.5 mg·kg-1处理(P＜ 0.05),0.5和1.0 mg·kg-1处理又显著高于对照组(P＜0.05).mRNA相对表达量结果显示,随着饲粮中ZEA水平的升高,断奶小母猪子宫内HSP70的mRNA相对表达量呈一次、二次线性升高(P＜0.001),尽管1.0 mg·kg-1和1.5 mg·kg-1处理差异不显著(P＞0.05),但1.5mg·kg-1处理显著高于0.5mg·kg-1处理(P＜ 0.05),0.5mg·kg-1处理又显著高于对照组(P＜0.05).[结论]饲粮中0.5 mg·kg-1 ZEA足以使子宫肌层和内膜明显增厚,子宫腺数量明显增多,使得子宫形态发生改变;本试验条件下,随ZEA浓度升高,HSP70免疫阳性反应增强,诱导子宫内HSP70的高水平表达,抵抗毒素应激对子宫细胞的损伤.