家福捕鸟蛛毒腺cDNA文库构建及其毒素-16序列和活性分析

家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu)是一种生活在广西、云南等地的蜘蛛新种.为了阐明其毒素的分子多样性和筛选河豚毒素不敏感型(Tetrodotoxin-resistant,TTX-R)钠通道抑制剂,利用SMART 法构建了毒腺全长cDNA文库,并进行DNA测序和表达序列标签(Expressed sequence tags,ESTs)聚类分析.结果表明家福捕鸟蛛毒腺双链cDNA条带分布在300~3000 bp.经测序得到752个高质量的EST序列,去冗余后得到257个唯一序列,其中毒素序列438条.家福捕鸟蛛毒素-16(Jiafu toxin-16,JF-16)是从家福捕鸟蛛粗毒中分离得到的1种分子量为3954.616的哺乳类神经毒素,其全序列为 H2N-ECTKLLGGCTKSSECCPHLGCRRKWPYHCGWDGTF-COOH.研究结果揭示JF-16的全长cDNA为518 bp,编码87个氨基酸.全细胞膜片钳试验结果表明JF-16对大鼠背根神经节(Rat dorsal root ganglion,DRG)细胞TTX-R钠通道具有抑制作用.说明JF-16是一种潜在的具有镇痛活性的蜘蛛毒素.本研究有利于开展家福捕鸟蛛毒腺转录组研究和JF-16潜在镇痛活性分析.