拟南芥抗病相关基因T1N6_22互作蛋白的酵母双杂交鉴定

利用酵母双杂交技术,鉴定拟南芥抗病相关基因T1N6_22的互作蛋白,为进一步明确T1N6_22基因调控拟南芥抗病的分子机制奠定基础.利用Gateway技术,构建T1N6_22基因及其候选互作蛋白基因的酵母双杂交载体AD-T1N6_22、AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480、BD-T1N6 _22、BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480.将空载的AD载体分别与BD-T1N6_22、BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480载体组合共同转化酵母感受态细胞,检测各基因的自激活活性,发现 T1N6_22、AT1G21400、AT2G19480基因无自激活活性, AT1G06050基因有自激活活性.将AD-T1N6_22载体分别与BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480载体组合,BD-T1N6_22载体分别与AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480载体组合,进行酵母双杂交试验.结果发现,AD-T1N6_22与BD-AT1G06050、BD-AT1G21400和BD-AT2G19480,BD-T1N6_22与AD-AT1G06050、AD-AT1G21400、AD-AT2G19480共转化的酵母细胞在二缺(-Leu/-Trp)、三缺(-Leu/-Trp/-His)和四缺(-Leu/-Trp/-His/-Ade)培养基上均可以生长,表明T1N6_22与AT1G06050、AT1G21400和AT2G19480在酵母细胞中直接互作.