分离小麦麦谷蛋白亚基的几个关键因素研究

小麦高分子量、低分子量麦谷蛋白亚基组成是影响小麦加工品质的重要因素,为了经济快速鉴定小麦高低分子量麦谷蛋白亚基组成,需要不断对提取和分离这些蛋白的方法进行优化.在Singh等提出的提取分离小麦高低分子量麦谷蛋白亚基方法的基础上,对其中涉及的单体蛋白去除、麦谷蛋白还原和烷化过程中使用的异丙醇浓度、烷化剂浓度以及烷化过程能否简化几个关键因素进行了深入研究.结果表明:在麦谷蛋白还原时,在10％ ～50％的异丙醇浓度范围内,不同浓度的异丙醇对高分子量麦谷蛋白亚基的提取效果没有差别,而低分子量麦谷蛋白亚基在用低浓度异丙醇提取时效果较差,随异丙醇浓度提高,提取效果逐渐提高,异丙醇浓度提高到30％时,提取效果达到最高,异丙醇浓度继续提高到50％,提取效果不再提高;使用30％和50％的异丙醇,去除单体蛋白的效果相同;把烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化,不同浓度(0.6％ ～1.4％)的烷化剂处理麦谷蛋白亚基的烷化效果相同,但烷化剂浓度为1.4％时电泳背景较重.优化后的方法为:在单体蛋白去除和麦谷蛋白还原时把异丙醇浓度由原来的50％降为30％,去掉单独的烷化步骤,把0.6％的烷化剂直接加到样品缓冲液中进行烷化.优化后的方法不但减少了试剂用量,简化了提取步骤,还提高了电泳条带强度.