白菜型冬油菜叶片质外体蛋白提取及响应低温胁迫的蛋白表达分析

为了研究质外体蛋白在低温胁迫下白菜型冬油菜抗寒的作用机理，以陇油7号五叶期叶片为试材，采用2种不同提取液（提取液 A：0．1 mol ／L pH 值＝7．6 Tris-HCl、0．2 mol ／L KCl、1 mmol ／L PMSF，提取液 B：0．05 mol ／L pH值＝7．6 Tris-HCl、0．01 mol ／L EDTA-Na2、0．02 mol ／L Vc、1 mmol ／L PMSF）进行质外体蛋白提取效果比较。结果表明：提取液 A 的蛋白提取率达到了（0．073±0．0046）mg ／g，比提取液 B 提高了42．88％；经六磷酸葡萄糖脱氢酶（G6 PDH）活性检测，提取液 A 提取的蛋白质污染率较提取液 B 低0．91％；双向电泳第一向等电聚焦 IEF 中，提取液 A 提取的蛋白质不仅除盐时间较提取液 B 短4．5 h，且获得的凝胶图谱清晰；通过丰度计算，得到陇油7号低温胁迫（4℃，48 h）后具有显著差异的蛋白点339个，其中表达量变化在2倍以上的蛋白点为46个，包括上调表达蛋白点18个，下调表达蛋白点21个，特异性表达蛋白点7个，推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫有关。对特异表达的7个蛋白点进行质谱分析鉴定，得到与低温胁迫相关的蛋白，为白菜型冬油菜超强抗寒品种陇油7号抗寒相关分子机理的研究奠定了基础理论。