蓖麻标雌／单雌／两性系花序 MSAP反应体系的建立

为了建立 Lm 型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌／单雌／两性系花序 MSAP 反应体系，提取不同类型不同发育时期的花序基因组 DNA，混合成基因池；用 EcoR Ⅰ和 Hpa Ⅱ／Msp Ⅰ的组合，12 h 可将 DNA 酶切完全；16℃条件下，将酶切产物与 EcoR Ⅰ、Hpa Ⅱ／Msp Ⅰ接头过夜连接；连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为10×PCR Buffer 2．5μL、dNTPs （10 mmol ／L）2．5μL、Mg2＋（25 mmol ／L）2．0μL、模板2．0μL、E 0扩增引物（10 pmol ／μL）1．5μL、H0扩增引物（10 pmol ／μL）1．5μL、LA Taq（5 U ／μL）0．25μL、ddH2 O 12．75μL。预扩增产物稀释10倍后用于选择性扩增。优化后的选择性扩增体系为10×PCR Buffer 2．5μL 、dNTPs （10 mmol ／L）2．0μL、Mg2＋（25 mmol ／L）4．0μL、模板3．0μL、E X 扩增引物（10 pmol ／μL）1．0μL、H ／MX 扩增引物（10 pmol ／μL）1．0μL、LA Taq（5 U ／μL）0．30μL、ddH2 O 11．2μL。