藏猪甲基转移酶3 a基因的SNP筛选及其在精子中的表达分析

为筛选藏猪DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)基因的单核苷酸多态性(SNP),分析Dnmt3a基因在藏猪精子中的表达水平,采用PCR-直接测序法对藏猪、大白猪、滇南小耳猪Dnmt3a基因进行SNP分析;分别应用实时荧光定量PCR技术、Westen blot方法对藏猪、大白猪精子中Dnmt3a基因的mRNA与蛋白质表达水平进行检测.结果显示,在Dnmt3a基因5'侧翼和第11外显子区发现2个SNP位点,位于藏猪Dnmt3a基因的5'侧翼区起始密码子上游2012 bp处的SNP(C→T)位点,其杂合度、多态信息含量均较高,表明群体内变异程度大、能提供的遗传信息较多,但该位点不是藏猪特有的SNP;位于藏猪Dnmt3a基因的第11外显子区第1360 bp处的SNP(C→T)位点,其杂合度、多态信息含量均较低,表明群体内变异程度小、能提供的遗传信息较少.藏猪精子中,Dnmt3a基因mRNA与蛋白质水平上的相对表达量均显著(P<0.05)低于大白猪.以上结果表明,藏猪Dn-mt3a基因5'侧翼区起始密码子上游2012 bp的突变位点可以作为藏猪分子育种中的候选标志;相对于大白猪,Dnmt3a基因在藏猪精子中mRNA及蛋白质水平上的低表达可能是藏猪精子高原适应性的DNA甲基化机制之一.