猪圆环病毒Ⅱ型河南地方株 ORF3的克隆及原核表达

为获得猪圆环病毒Ⅱ型 ORF3编码蛋白，研究该蛋白的特性及功能，根据 GenBank 数据库中PCVⅡ的基因组序列设计引物，利用 PCR 从病料基因组 DNA 中扩增 PCVⅡ河南地方株 ORF3，将其克隆至表达载体 pET 32a 中进行诱导表达，SDS PAGE 电泳检测重组蛋白表达情况，采用 Ni＋NTA 亲和纯化表达产物，透析复性后免疫日本大白兔制备多抗血清，并采用 ELISA 和 Western blot方法检测多抗血清的效价和特异性。结果显示，PCR 扩增获得全长315 bp 的 ORF3，重组质粒经测序和双酶切证实构建正确；SDS PAGE 结果显示，ORF3能够在大肠杆菌中表达，产物的分子量约为30 ku，以包涵体形式存在；纯化的重组蛋白具有较好的抗原性，制备的多抗血清抗体效价达1∶12800以上，抗体特异性高，能与表达的 ORF3编码蛋白结合。成功克隆了 PCVⅡ河南地方株 ORF3并实现原核表达，获得纯化的重组 ORF3编码蛋白。