CRISPR/Cas9技术在获取拟南芥双突变体材料中的应用
Chinese Agricultural Science Bulletin（2018）
Abstract
为了研究含双MATH结构域基因sb3与sb6的功能,需要创制这2个紧密连锁基因的双突变体.利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对拟南芥Col-0中的sb3、sb6基因进行特异性定点双敲除.通过PCR和Singer测序验证,共获得10株T0代转基因植株,其中5株在目标片段上没有发生编辑;另5株在sb3基因上的目标序列都发生了编辑,在sb6基因的目标序列上只有2株发生了编辑.至此成功获得了sb3与sb6基因双敲除的突变体,且获得该突变的类型为核苷酸缺失突变体.这个双突变体的获得为进一步研究双MATH结构域基因在拟南芥中的功能奠定了良好的基础.
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Key words
dual MATH-domain genes,CRISPR/Cas9,special double knockout,closely linked,Arabidopsis thaliana
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