扁桃CBF2基因的克隆及原核表达

为进一步研究扁桃CBF2目的蛋白功能,探明CBF2转录因子在扁桃中的抗寒分子机制,以新疆栽培扁桃(Amygdalus communis L.)‘双软’叶片为材料,通过PCR技术从基因组DNA中克隆CBF2基因,命名为AcCBF2,将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-AcCBF2并转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;生物信息学推测显示该基因的开放阅读框(ORF)为717 bp,编码238个氨基酸,其分子量为26.59kD,等电点为5.29.系统发育树分析结果显示,AcCBF2基因与扁桃CBF1、光核桃和桃的亲缘关系最近.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明,该蛋白分子量约47 kD,与预期蛋白大小基本一致.AcCBF2基因在E.coli Rosetta中的最佳诱导条件为IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导4h.