百合AGPase基因RNAi载体构建及遗传转化研究

[目的]AGPase基因可在百合鳞茎膨大发育过程中影响淀粉的合成代谢,从而调控鳞茎发育,构建干扰AGPase基因RNAi载体并遗传转化进行反向下调作用研究,可为该调控机制的研究提供更多信息.[方法]克隆300 bp的AGPase基因保守序列,利用Gateway技术通过BP反应将该序列插入入门载体pDONR221,进行LR反应将该序列正反向插入干扰载体pJawohl8-RNAi中,经过酶切鉴定所构建RNAi载体的正确性;并通过农杆菌介导法转入百合组培苗中,PCR检测RNAi载体转化农杆菌,荧光定量PCR检测农杆菌转化植株的AGPase相对表达量变化.[结果]成功构建pDONR221-AGPase入门克隆与pJawohl8-RNAi-AGPase表达载体,遗传转化百合愈伤诱导出AGPase表达量下调的转化植株.[结论]采用Gateway技术可方便构建RNAi表达载体,选择的AGPase保守序列能作为干扰片段对百合AGPase自身转录的mRNA进行下调.