利用NusA促溶标签原核表达Butelase 1蛋白

Qi-tao LIU,Yan-ce ZHU, Wei-jie WANG,Pei-ge CHEN,Shi-ping SUN,Wan-ying GUO,Yue-ting ZHENG

Acta Agriculturae Jiangxi（2017）

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摘要

为获得可溶性Butelase 1蛋白,将Butelase 1基因插入到带有NusA促溶标签的原核表达载体上,将重组质粒转化至大肠杆菌(E.coli) BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达,用Ni-NTA亲和层析法纯化表达的可溶性蛋白,用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达情况.酶切和测序结果证实pET21b-His6-NusA-Butelase 1原核表达载体构建成功.SDS-PAGE分析结果表明诱导后表达的融合蛋白大小为94.9 kD,主要为可溶性表达,部分为包涵体表达.Western blot检测结果显示,纯化得到的His6-NusA-Butelase 1融合蛋白用抗His6-Tag抗体鉴定时为特异性表达.

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