产低毒性脂多糖大肠杆菌J5基因重组株的构建

细菌脂多糖(LPS)对宿主细胞具有一定的毒性,但经修饰后的单磷酸类脂A(MPLA)却是一种无毒性的高效免疫佐剂.选择天然O抗原不完全的大肠杆菌J5疫苗株为出发菌株,利用 λ-Red同源重组技术导入外源弗朗西斯菌(Francisella novicida)lpxE基因,缺失大肠杆菌lpxM基因.结果 显示,J5ΔlacI::lpxEΔlpxM基因重组株的LPS鲎试剂活性较DH5α和J5原菌显著降低;对4周龄的ICR小鼠腹腔注射LPS提取物,重组菌和PBS组的小鼠体征及肝脏切片均正常.同时,腹腔注射大肠杆菌J5和DH5α的小鼠被毛凌乱、精神抑郁、肝脏细胞肿大,发生炎性浸润,有明显的毒性反应.以上结果说明,J5重组菌的LPS已经区别于原菌,是低毒性的MPLA产物.上述重组株的成功构建,能为生产廉价的兽用MPLA免疫佐剂奠定工作基础.