烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化
Jiangsu Agricultural Sciences（2017）
摘要
通过对烟草驱动蛋白家族新成员NtTkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与NtTkr互作的候选蛋白.为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以pGBKT7-NtTkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMXB10-NtTkr-3582经生物公司测序,结果正确.将其转化为BL21(DE3),IPTG诱导其表达目的蛋白,经几丁质法纯化及SDS-PAGE检测,结果表明笔者得到了高纯度的目的蛋白.该试验为进一步运用Pull Down确定NtTkr与候选蛋白之间的体外互作及深入研究该蛋白的其他生物学功能奠定了基础.
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