H9和H6亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立

Dan LI,Meng LI,Zhixun XIE,Sisi LUO,Liji XIE,Minxiu ZHANG,Jiaoling HUANG,Qing FAN,Sheng WANG,Zhiqin XIE,Xianwen DENG,Tingting ZENG,Yanfang ZHANG

Guizhou Agricultural Sciences（2020）

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摘要

为H9与H6亚型禽流感病毒(AIV)的监测及其防控提供技术支撑,依据Genbank中H9和H6亚型AIV的HA基因及所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计3对特异性引物,优化退火温度和引物浓度及其配比等条件,建立并优化可同时鉴别检测H9和H6亚型AIV的三重RT-PCR检测方法,并对所建方法进行特异性、敏感性及临床样品检测验证.结果表明:三重RT-PCR反应的最佳体系为2×PCRMix 12.5 μL,H9与H6亚型AIV cDNA共2μL为模板,特异性引物M-F和M-R(20 pmol/μL)加入量为0.6μL,特异性引物H9-F和H9-R(20 pmol/μL)及H6-F和H6-R(20 pmol/μL)的加入量分别为0.7 μL和1μL,用RNA-free水补足至终体积为25μL,退火温度53℃.该方法可在一个反应管内同时鉴别检测H9与H6亚型AIV,特异性强,敏感性高,可推广应用.

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