獭兔MITF不同可变剪接体对黑色素沉积的影响

小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)在哺乳动物皮毛的黑色素形成中发挥了重要作用,而兔MITF基因功能及其不同可变剪接体对黑色素沉积的影响还未见报道.基于此,根据NCBI预测结合文献报道,设计MITF编码区特异性引物,采用RT-PCR结合TA克隆测序的方法,鉴定兔 MITF基因的6种可变剪接体:MITF X1、MITF X2、MITF X3、MITF X4、MITF X5和MITF X6.通过进化树分析,发现6个可变剪切体归为一个分支,与人和猩猩的进化距离最近.进一步构建MITF不同剪接体的过表达载体,转染到家兔黑色素细胞中,发现MITF蛋白亚细胞定位于细胞核中;通过荧光定量检测发现MITF X1～X4过表达显著增加GPNMB的mRNA表达量(P＜0.05),MITF XI～X3过表达显著增加TYR的mRNA的表达量(P＜0.05),MITF X2过表达显著增加PMEL-17的mRNA表达量(P＜0.05),其余MITF剪接体的过表达对下游基因表达量的影响不显著(P＞0.05);通过黑色素含量测定,发现MITF XI～X6剪接体显著增加黑色素细胞中总黑色素和真黑色素的含量(P＜0.05),提示MITF N端的剪接变化并不影响黑色素沉积功能,但不同剪接体的下游信号通路存在差异.