绵羊Spry4基因的克隆、真核表达及序列分析
Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica（2015）
Abstract
为探究Spry4在绵羊毛囊发育过程中的作用,以美利奴羊皮肤组织总RNA的反转录产物为模板,采用PCR技术扩增获得Spry4基因全长编码区,并克隆至pCRTM BluntⅡTOPT@vector载体进行测序.随后将ToPo-Spry4亚克隆至pcDNA3.0真核表达载体,再经脂质体转染至293T细胞表达,通过Western Blot 鉴定表达产物,分析Spry4核酸和氨基酸序列.结果表明,首次克隆获得绵羊Spry4基因编码序列(GenBank 登录号KP280032),序列长954 bp,编码298个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸同源性达91％以上;预测Spry4蛋白不存在信号肽和跨膜结构域;Western Blot检测显示,重组表达的蛋白分子质量为36 ku,与预期一致.
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