西葫芦ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选
Journal of Shanxi Agricultural Sciences（2017）
Abstract
为了确定西葫芦ISSR-PCR的最佳反应体系,以西葫芦基因组DNA为模板,采用正交试验方法,对模板DNA、引物及2×Taq PCR Master Mix的用量进行了优化,并通过梯度PCR确定不同引物的最佳退火温度.结果表明,最佳反应体系为:在20μL的体系中,模板DNA(50 ng/μL)1L,引物(10 μmol/L)3 L,Master Mix 10 μL;利用该体系从50条ISSR引物中筛选出18条扩增条带清晰、多态性好的引物.这一体系的建立及引物筛选为以后利用ISSR分子标记技术对西葫芦进行研究提供了科学依据.
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