鸡胚来源的外泌体不同提取方法比较

[目的]鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能.[方法]收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A～D.比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况.[结果]4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40～200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为D>C>A>B,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为B>D>C>A.[结论]综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法.