供核细胞对绵羊体细胞克隆效率的影响

[目的]在制作克隆胚胎时,供核细胞直接制约着重构胚的融合数量和发育潜力.研究供核细胞对绵羊体细胞对克隆效率的影响.[方法]从供核细胞的静置时间,研究传代次数与周期处理,供核细胞不同克隆株,不同羊源细胞等,以重构胚融合率和囊胚发育率为检测指标,判定单因素供核细胞对克隆胚胎的影响.[结果]在供核细胞静置时间方面,供核细胞静置15～30 min内完成重构胚制作的融合率极显著高于静置2 h左右的供核细胞组(90.10％vs 78.84％)(P<0.01),但囊胚率差异不显著(15.58％vs 14.65％)(P>0.05);在供核细胞传代次数(d1～d3)和汇合期生长时间方面(24 and 48 h),各组的融合率差异不显著(70.37％、76.03％、71.92％vs 72.97％)(P>0.05),但囊胚率有增高的趋势(5.96％、9.06％、15.85％vs 20.16％);在同一供核细胞不同克隆株方面,供核细胞对融合率和囊胚率存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的影响;在不同个体方面,供核细胞株对融合率和囊胚率存在极显著的影响(P<0.01).[结论]15～30 min内的静置供核细胞、传代3次并延长汇合期细胞生长时间(48 h),多选细胞株更有利于克隆胚的制作.