靶向加工番茄elF4E1的CRISPR/Cas9载体有效性验证

[目的]验证基于CRISPR/Cas9系统构建的靶向编辑加工番茄(Solanum lycopersicum)elF4E1基因载体的有效性,为CRISPR/Cas9系统在培育PVY抗性植株中的应用提供技术支持.[方法]构建靶向编辑番茄真核翻译起始因子elF4E1基因的CRISPR/Cas9系统表达载体,用农杆菌渗透法瞬时转化番茄植株,PCR扩增已转化植株靶位点周围DNA序列后用HaeⅢ进行酶切,回收未切开的条带与pGEM-T载体连接后进行单克隆测序.[结果]对测得的9个克隆序列进行比对分析,在PAM(protospacer adjacent motifs)上游的6～8 bp的碱基处均发生突变,并且都为单碱基的替换,导致多肽链中单个氨基酸的替换.[结论]利用CRISPR/Cas9基因组编辑系统构建的载体能够特异性地靶向加工番茄eIF4E1基因,为利用CRISPR/Cas9系统敲除eIF4E1基因,获得抗PVY病毒的番茄育种材料奠定了基础.