胸膜肺炎放线杆菌ApxIA N端基因的克隆与原核表达

[目的]为猪接触传染性胸膜肺炎的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据.[方法]以胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清10型菌株为材料,采用PCR技术对其ApxIA的N端基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),利用免疫印迹分析鉴定ApxIA N端基因表达产物的免疫活性.[结果]ApxIA N端基因PCR扩增产物与标准10型ApxIA gene(D16582)的同源性为99.7%.NcoI和HindIII双酶切鉴定结果表明,目的基因已成功转入原核表达载体pET-32a中.含重组质粒的大肠杆菌BL21经IPTG诱导后表达了相对分子量为779 kDa的目的蛋白,该蛋白分子量与标准ApxIA蛋白(Marker)相同.[结论]SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测结果表明,ApxIA N端基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性.