一种快速脱盐制备大肠杆菌电转化感受态细胞的方法

为了建立一种高效快捷的大肠杆菌(Escherichia coli)电转化方案,采用类似密度梯度离心的方法,使用角转子离心机达到快速除盐的目的 .研究发现,以20％甘油(V/V)/1.5％甘露醇(m/V)溶液作为梯度介质,采用菌悬液与梯度介质比例为1:5(V/V)时形成的密度梯度可有效地进行离心除盐,离心后的细胞以20％甘油(V/V)/1.5％甘露醇(m/V)溶液重悬,随后在电场强度为15 kV/cm的条件下进行电转化能得到较高的转化效率,而在室温条件下进行电转化试验不能提高转化效率.本研究仅通过2次离心,电转化效率可达到4.2×109 CFU/μg DNA,大大简化了试验流程.