转基因玉米MON863质粒DNA双重数字PCR定值方法的建立

针对转基因玉米MON863质粒DNA,研究建立一套双重数字PCR(ddPCR)定值方法.优化引物探针浓度,退火温度等条件,考察方法特异性、线性范围、精密度.结果表明,外源基因MON863在1.6～6743.3 copies和内源基因Adh在1.1～6770.0 copies的浓度范围均呈线性关系,r2为1;MON863基因和Adh基因的定量限分别为8.3 copies和7.9 copies;方法精密度小于5％.采用该方法对基体标准物质进行验证,误差小于10％.该方法每个反应体系都含有内源(VIC)和外源(FAM)基因,能实现内外源基因的同时检测,避免同一样品在不同反应体系造成的定值差异.结果显示该方法与单重数字PCR定值结果无显著差异,重复性优于单重数字PCR结果,方法准确可靠.