来源于Rhodohalobacter barkolensis的昆布多糖酶RbLam16的重组表达及生产条件优化

为实现昆布多糖酶的异源表达以及提高工程菌的产酶水平,将来源于RhodohaIobacter barkolensis的昆布多糖酶RbLam16基因经密码子优化后克隆至pPIC9K质粒,并重组到毕赤酵母GS115中.分泌表达的重组酶经镍柱纯化后对其酶学性质进行表征;为提高酶的表达量,对重组毕赤酵母菌的发酵条件进行了优化.结果 表明:RbLam16能够在毕赤酵母GS115中高效分泌表达;以来源于海带的昆布多糖作为水解底物时,RbLam16最适反应温度及pH分别为55℃和pH 7.0;通过热稳定性及pH稳定性研究发现,RbLam16在55℃保温30 min后,残留酶活力在90％以上;在50 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.0)中保存24 h后残留酶活力高达90％;金属离子Mn2和Co2对酶活力有促进作用,而Cu2、乙二胺四乙酸和十二烷基硫酸钠可严重抑制酶活力.发酵条件优化结果显示,在发酵液初始pH为6.0、培养温度为28℃以及每24 h添加体积分数1.5％的甲醇条件下发酵120 h,发酵上清液中酶活力达到27.42 U/mL,与初始酶活力相比提高了26.42％.RbLam16的高效催化水平以及较高的热稳定性和酸碱耐受力为其在食品、能源开发等领域的应用提供更多的可能.