基于实时荧光环介导等温扩增快速检测鸡肉中的大肠杆菌O157∶H7

以大肠杆菌O157∶H7的VT2基因序列设计特异性引物,利用Midori Green新型核酸荧光染料,建立鸡肉中大肠杆菌O157∶H7实时荧光定量环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测方法.纯培养大肠杆菌O157∶ H7检测灵敏度达3.5 CFU/反应,需时45 min.模拟大肠杆菌O157∶H7污染鸡肉样品,经37℃增菌4h,用Whirl-pak无菌袋过滤离心得沉淀,提取样品DNA模板用于Rti-LAMP反应,检测大肠杆菌O157∶H7灵敏度达140 CFU/g,整个检测流程约7h.采用蒙脱石封闭的活性炭前处理污染鸡肉样品,不经增菌过程,结果表明:该Rti-LAMP检测方法灵敏度达12 CFU/g,整个检测耗时约4.5h.市购鸡肉样品51份,以大肠杆菌国标检测法为对照,研究基于Rti-LAMP联合增菌或封闭活性炭预处理而不经增菌的两种方法,对比检测临床鸡肉样品大肠杆菌O157∶H7污染率.结果:国标法和增菌的Rti-LAMP两种方法均检测到同一鸡肉样品为大肠杆菌O157∶H7阳性,经封闭活性炭预处理而未经增菌的Rti-LAMP则检测到8份鸡肉样品大肠杆菌O157∶H7阳性.研究表明,封闭活性炭预处理的Rti-LAMP检测方法较国标法更灵敏、快速、简便、特异地检测鸡肉中大肠杆菌O157∶H7污染.