轮状病毒核酸标准物质研究
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology（2018）
Abstract
目的:研制用于食品中轮状病毒聚合酶链式反应检测的核酸标准物质.方法:从RV阳性粪便样品中提取RNA后,利用基因克隆体外转录方法制备RV cRNA纯品,均匀性初检后,稀释至10-4后分装,制备RV核酸标准物质样品.cRNA经核酸测序确定同源性后,采用微滴式数字PCR方法进行均匀性和稳定性研究.RV核酸标准物质的标准值由多家实验室应用ddPCR联合定值获得,并进行不确定度分析.结果:均匀性结果显示RV核酸标准物质组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P＜0.05).稳定性检验表明室温(20～25℃)3 d,4℃7 d,-20℃21 d及-80℃6个月样品cRNA含量无显著变化.定值研究和不确定度评价得RV核酸标准物质的标准值为6.60×107拷贝/μL,其扩展不确定度为0.60×107拷贝/μL.结论:RV核酸标准物质均匀性和稳定性符合二级标准物质技术规范,可作为RV PCR检测的标准物质.
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