环介导等温扩增技术检测醋化醋杆菌

为实现醋酸菌的快速灵敏检测,以醋化醋杆菌为代表菌株,首次使用环介导等温扩增技术(LAMP)进行16S-23S ITS rRNA核酸扩增,通过特异性检测后对反应条件进行优化,并对扩增产物的检测方法进行比较.结果表明,该组引物特异性强,优化的25 μL体系为:6 mmol/L MgCl2,1.4 mmol/L dNTPs,内引物(FIP和BIP)各0.8 μmol/L,外引物(F3和B3)各0.2 μmol/L,l×Bst DNA聚合酶反应缓冲液,8U Bst DNA聚合酶,0.8 mmol/L甜菜碱,2 μL DNA模板,用灭菌蒸馏水补足体系.62℃反应30 min即可完成扩增反应,产物经琼脂糖凝胶电泳后检测灵敏度达3.63× 101 CFU/mL.用肉眼观察白色焦磷酸镁沉淀,仅观察到3.63×102 CFU/mL以上的阳性产物,而在终产物中加入10000×0.1 μL SYBR Green Ⅰ后,可通过肉眼观察产物颜色变化,得到与琼脂糖凝胶电泳法相同的检出限,并且缩短了检测时间.