海产品中霍乱弧菌免疫磁分离和环介导等温扩增快速检测方法的建立

目的:采用纳米免疫磁珠分离霍乱弧菌,建立霍乱弧菌环介导等温扩增检测方法,以缩短检测时间.方法:采用本实验室制备的霍乱孤菌单克隆抗体制备纳米免疫磁珠,特异性吸附霍乱弧菌,结合环介导等温扩增技术,建立霍乱弧菌快速检测方法.结果:霍乱弧菌纳米免疫磁珠在菌体浓度103 CFU/mL水平,对霍乱弧菌的捕获率最高达70％.免疫磁分离结合环介导等温扩增技术,在纯培养、无需增菌的情况下,检测灵敏度达到4.8×102 CFU/mL菌液.通过测试102株霍乱弧菌和101株非目标菌,该检测方法均具有良好的特异性.在食品基质添加试验中,其检测限为1 CFU/25g样品,增菌时间缩短到8h.结论:霍乱弧菌免疫纳米磁珠结合环介导等温扩增技术缩短了增菌时间.目标菌纯培养、无需增菌条件下,检测灵敏度达到4.8×102 CFU/mL增菌液.人工添加样品,8h增菌条件下,检测低限达到1 CFU/25 g样品.