基于噬菌体展示纳米抗体的绿色免疫PCR检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇

目的:在获得脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)抗独特型纳米抗体的前期基础上,将纳米抗体作为酶标抗原的替代物,应用于荧光定量免疫聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)体系,实现DON的高灵敏、绿色免疫分析.方法:将特异性结合DON抗体的噬菌体展示纳米抗体(P-28)作为竞争抗原,以编码P-28纳米抗体的DNA为靶标,设计特异性PCR扩增引物,优化荧光定量免疫PCR退火温度、抗DON抗体浓度、P-28投入量等参数,建立基于间接竞争模式的荧光定量免疫PCR检测DON的方法.结果:本研究建立的荧光定量免疫PCR方法线性检测范围为0.1～1 000 ng/mL,IC50值为(3.96±2.21)ng/mL,最低检出限为0.048 ng/mL,并与其他真菌毒素无交叉反应.结论:该方法直接使用噬菌体展示纳米抗体作为竞争抗原的替代物,应用于免疫PCR体系,避免了使用传统的化学合成酶标抗原所带来的环境污染、操作毒性等缺陷,并具有良好的特异性及灵敏度.